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ELISA試劑盒靈敏度低?

點擊次數(shù):12   發(fā)布時間:2024/9/26 9:34:34

近日,有客戶在做完實驗后,反映陽性對照、質(zhì)控在內(nèi)的所有板孔顏色均較淡。這是什么原因造成的?我司技術整理后給出如下解析,邀您來看看!

 

容易造成的原因有:

1.試劑盒必須在保質(zhì)期內(nèi)使用, 超過保質(zhì)的產(chǎn)品可能會產(chǎn)生很弱的信號;

2.試劑盒沒有按規(guī)定進行保存,受高溫影響;

3.試劑、樣品用前未平衡至室溫;

4.加入試劑的體積和時間有誤,移液器計量不準,吸嘴內(nèi)水分太多或不清潔;

5.洗板及加樣過程中,酶標受污染失活而失去催化顯色劑顯色的能力;

6.孵育時間及孵育溫度未達到要求 ,反應板放入培養(yǎng)箱時注意溫度并及時調(diào)整;

7.洗板次數(shù)過多,或濃縮洗液稀釋倍數(shù)不符合要求;洗滌沖擊力太大。浸泡時間太長;

8.顯色劑加量不足或順序顛倒,或混合后加入;

9.底物作用時間不夠;

10.蒸餾水水質(zhì)有問題。

 

解決辦法:

1.實驗前檢查試劑的組分及批號,確認試劑未過期。

2.不要將試劑盒長時間置于常溫下,按使用規(guī)定儲藏。

3.確定所使用的試劑體積正確,加入時間適當。

4.校正移液器,移液器與吸嘴配合要緊密吻合。移液不宜太快,排放應完全。

5.確認盛酶標的容器不含酶抑制劑如疊氮鈉等,確認配制洗液的容器已洗干凈,確認配制洗液的純化水達到要求且未受污染。

6.孵育溫度應控制在 37-38℃,孵育時間嚴格按照說明書操作。保溫期內(nèi)不宜多開門,以免影響保溫。

7.嚴格按說明書要求稀釋濃縮洗液及洗板,減小洗滌沖擊力,按說明書要求置留洗滌液時間和洗滌次數(shù)。

8.顯色劑滴瓶垂直向下,持力均勻,滴速不宜過快,先加顯色劑 A,后加顯色劑B,不可將A、B液混合后加入

9.準確定時。

10.測定蒸餾水配制試劑對酶免疫法的影響。

 

上海恒遠生物專業(yè)提供生命科學領域的技術服務,提供實驗技術服務,為廣大科研工作者大大節(jié)省了重復勞動的時間和精力,我們有過硬的技術咨詢和完善的售后服務,購買ELISA試劑盒贈送免費代測服務,在線一對一技術指導,為您解決后顧之憂。


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